¡¡¡¡¡¡ SN 0169-1992 出口食品中大腸菌群¡¢糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法

¡¡¡¡¡¡¡¡GB/T 4789.6-2003 食品衛生微生物學(xu¨¦)檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗

¡¡¡¡¡¡¡¡GB/T 4789.6-1994 食品衛生微生物學(xu¨¦)檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗£¨已經(j¨©ng)作廢£©

?#35377;N標準方法為例£¬進(j¨¬n)行說(shu¨­)明¡£

樣品制備£º
¡¡¡¡以無(w¨²)菌操作取25 g樣品,放入裝有225 mL稀釋劑的滅菌均質(zh¨¬)杯內,于8000 r/min均質(zh¨¬)1¡«2min,制成1:10樣品勻液(也可用滅菌乳缽?#24515;?#30340;方法代替)¡£
¡¡¡¡稀釋樣品勻液根據對樣品污染情況的估計,用稀釋劑將樣品勻液制成一系列十倍遞增的樣品稀釋液,如10**-2¡¢10**-3¡¢10**-4……¡£從制備樣品勻液?#26009;?#37323;完畢,全過(gu¨°)程不得超過(gu¨°)15min¡£

¡¡¡¡附£º這是一種9管MPN法測定方法£¬什么是MPN法£¿

LST和EC初步篩選£º
¡¡¡¡對每個(g¨¨)樣品,選擇適宜的三個(g¨¨)連續稀釋度的樣品稀釋液¡£每個(g¨¨)稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯,每管接種1mL¡£將接種管置于36±1¡æ培養48±2h¡£

¡¡¡¡觀(gu¨¡n)察試管的產(ch¨£n)氣情況£º檢查倒管內是否有氣泡產(ch¨£n)生,用直徑為3mm的接種環(hu¨¢n)將所有48±2h內產(ch¨£n)氣的LST肉湯管培養物?#21697;N于EC肉湯管中¡£將所有接種的EC肉湯管在30min內放入帶蓋44.5±0.5¡æ水浴箱內,培養48±2h¡£

¡¡¡¡附£ºLST肉湯¡¢EC肉湯?#34892;?#20160;么£¿

EMB平板£º

¡¡¡¡取其產(ch¨£n)氣管的培養物劃線(xi¨¤n)接種于伊紅美藍(EMB)平板,36±1¡æ培養24±2h¡£

¡¡¡¡檢查平板上有無(w¨²)具黑色中心有光澤或無(w¨²)光澤的典型菌落¡£

¡¡¡¡如有典型菌落,則從每個(g¨¨)平板上至少挑取2個(g¨¨)典型菌落£»如無(w¨²)典型菌落,則從每個(g¨¨)平板上至少挑取2個(g¨¨)可疑菌落¡£用接種針接觸菌落中心部位,?#21697;N到營(y¨ªng)養瓊脂斜面上,36±1¡æ培養18¡«24h¡£

¡¡¡¡附£º怎樣進(j¨¬n)行平板劃線(xi¨¤n)分離£¿

¡¡¡¡¡¡¡¡平板劃線(xi¨¤n)示例

¡¡¡¡¡¡¡¡EMB平板原理及照片

生化試驗£º
¡¡¡¡將斜面培養物?#21697;N到下列培養基中進(j¨¬n)行生化試驗¡£¡¡¡¡
¡¡¡¡1¡¡色氨酸肉湯£º在36±1¡æ培養24±2h后,加Kovacs氏試劑0.2¡«0.3mL,上層出現紅色為靛基質(zh¨¬)陽(y¨¢ng)性反應¡£

¡¡¡¡附£º靛基質(zh¨¬)試驗原理及照片

¡¡¡¡2 MR-VP培養基£º在36±1¡æ培養48±2h¡£以無(w¨²)菌操作移取培養物1 mL至13mm×100mm試管中,加5£¥α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40£¥氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結晶,振搖試管后靜置2h,如出現伊紅色,為VP試驗陽(y¨¢ng)?#28020;?br /> ¡¡¡¡將MR-VP培養物的剩余部分再培養48h滴加5 滴甲基紅溶液¡£如培養物變紅色,為甲基紅試驗陽(y¨¢ng)性,若變黃色則為陰性反應¡£

¡¡¡¡附£ºMR-VP試驗原理及照片

¡¡¡¡3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯£º于36±1¡æ培養96h記錄有無(w¨²)生長(ch¨¢ng)¡£

¡¡¡¡附£º枸椽酸鹽利用試驗原理及斜面顯色照片

¡¡¡¡4 LST肉湯£º于36±1¡æ培養48±2h,觀(gu¨¡n)察試管中是否產(ch¨£n)氣¡£
¡¡¡¡5¡¡革蘭氏染色£º取18h營(y¨ªng)養瓊脂斜面培養物作革蘭氏染色¡£大腸桿菌為革蘭氏陰?#28020;?br />

大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下£º

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¡¡¡¡靛 基 質(zh¨¬)©§¡¡¡¡ MR¡¡¡¡ ©§ ¡¡¡¡VP¡¡¡¡ ©§¡¡ 枸椽酸鹽 ©§ 鑒定(型別)
©¥©¥©¥©¥©¥©¥©ï©¥©¥©¥©¥©¥©¥©ï©¥©¥©¥©¥©¥©¥©ï©¥©¥©¥©¥©¥©¥©ï©¥©¥©¥©¥©¥©¥©¥©¥©¥
¡¡¡¡¡¡¡¡£«¡¡©§¡¡¡¡ £«¡¡¡¡ ©§ ¡¡¡¡£­ ¡¡¡¡©§ ¡¡£­ ¡¡¡¡¡¡©§典型大腸桿菌
¡¡¡¡¡¡¡¡£­¡¡©§ ¡¡¡¡£«¡¡ ¡¡©§ ¡¡¡¡£­ ¡¡¡¡©§ ¡¡£­ ¡¡¡¡¡¡©§非典型大腸桿菌
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¡¡¡¡¡¡¡¡£«¡¡©§¡¡¡¡ £«¡¡¡¡ ©§¡¡¡¡ £­¡¡¡¡ ©§ ¡¡£« ¡¡¡¡¡¡©§典型中間型
¡¡¡¡¡¡¡¡£­¡¡©§¡¡¡¡ £« ¡¡¡¡©§ ¡¡¡¡£­ ¡¡¡¡©§ ¡¡£«¡¡¡¡¡¡ ©§非典型中間型
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¡¡¡¡¡¡¡¡£­¡¡©§¡¡¡¡ £­ ¡¡¡¡©§¡¡¡¡ £«¡¡¡¡ ©§¡¡ £«¡¡¡¡¡¡ ©§典型產(ch¨£n)氣腸桿菌
¡¡¡¡¡¡¡¡£«¡¡©§¡¡¡¡ £­ ¡¡¡¡©§ ¡¡¡¡£« ¡¡¡¡©§ ¡¡£« ¡¡¡¡¡¡©§非典型產(ch¨£n)氣腸桿菌
©¥©¥©¥©¥©¥©¥©ß©¥©¥©¥©¥©¥©¥©ß©¥©¥©¥©¥©¥©¥©ß©¥©¥©¥©¥©¥©¥©ß©¥©¥©¥©¥©¥©¥©¥©¥©¥
¡¡¡¡如出現上表以外的生化反應類(l¨¨i)型,表明培養物可能不純,應重新劃線(xi¨¤n)分離,必要時(sh¨ª)做
重復試驗¡£

結果報告£º

¡¡¡¡大腸桿菌為革蘭氏陰性無(w¨²)芽孢桿菌,發(f¨¡)酵乳糖產(ch¨£n)酸產(ch¨£n)氣,IMViC試驗為£«£«£­£­或£­£«£­£­,再根據LST肉湯陽(y¨¢ng)性管數查MPN表,報告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN值¡£