培養基在使用之前必須進(jìn)行滅菌處理，將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過(guò)濾除菌、干熱滅菌、濕熱滅菌及輻照滅菌等。其中，濕熱滅菌法又包括四種方式:煮沸法、流動(dòng)蒸汽滅菌法、間歇滅菌法和壓力蒸汽滅菌法。通常來(lái)說(shuō)，使用比較多的是壓力蒸汽滅菌法。

但是對于?#34892;?#22521;養基來(lái)說(shuō),高壓條件會(huì )損壞培養基中的某些成分,不利于培養基的使用，所以只能采用煮沸滅菌的處理方法。本文主要就煮沸滅菌方法進(jìn)行討論。

有關(guān)煮沸滅菌的描述,通常有如下幾種方式:

a、稱(chēng)取本品41.5g,加熱溶解于1000mL蒸餾水中,煮沸不要超過(guò)2分鐘。無(wú)需高壓滅菌。臨用時(shí)制備，不得超過(guò)3小時(shí)。

b、稱(chēng)取本品50.3g,加入1000mL蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，冷至45-50℃， 搖勻，傾入無(wú)菌平皿備用。無(wú)需高壓滅菌。

c、稱(chēng)取本品89g,煮沸溶解于1000mL蒸餾水中，冷至45-50℃時(shí)，傾入無(wú)菌平皿，備用。注:無(wú)需高壓滅菌。

d、稱(chēng)取本品57g,加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中，不要過(guò)分加熱，冷至50-55℃時(shí)，傾入無(wú)菌平皿,部分開(kāi)蓋干燥2h,然后蓋上，備用。無(wú)需高壓滅菌。在24小時(shí)內使用。

這些方法描述中，都特別強調“無(wú)需高壓滅菌”、“不要過(guò)分熱”、“煮沸充分溶解”,那么究竟該怎樣操作，才能達到既滅菌完全又盡量降低對培養基的破壞呢?

1、關(guān)于煮沸方式，有人提出可以隔水煮沸，但經(jīng)過(guò)反復試驗，發(fā)現這種煮沸方式存在兩大弊端:

①溫度不夠，達不到滅菌效果;

②經(jīng)隔水煮沸的含瓊脂培養基,在水浴的過(guò)程中易出現分層現象。

2、為了對培養基進(jìn)行?#34892;?#29038;沸滅菌,根據我們實(shí)踐摸索，建議如下操作:

①準備好電磁爐和搪瓷缸(不要用鐵質(zhì)容器) ;

②將培養基按比例加水，稱(chēng)量至搪瓷缸中，用玻璃棒不斷攪拌，直至完全溶解、無(wú)明顯團狀物或顆粒;

③將搪瓷?#23383;?#20110;電磁爐上，大火燒開(kāi)，期間持續攪拌,避免糊底;當?#22909;?#23436;全沸騰后，立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開(kāi),算是一次煮沸操作;?#22909;?#22238;落后，立即放回電磁爐,重復上面的步驟;總共煮沸3次即可。

④將煮好的培養基冷卻至需要的溫度,進(jìn)行傾注平皿等操作。

注意事項

1、補水

加熱煮沸的過(guò)程，培養基中的部分水分會(huì )蒸發(fā)掉，造成水分偏少，影響培養基的質(zhì)量(如平板強度等)，導致菌落形態(tài)等結果的偏差，因此為了盡量減少誤差,需要在煮沸之前，向搪瓷缸中補加適量培養基配制用水，經(jīng)驗估計,通常每煮一缸培養基需補加15-20mL水，實(shí)際操作中，需根據各實(shí)驗室的具體情況(容器大小及裝量)進(jìn)行摸索。

2、溶解

所有的培養基，在煮之前必須攪拌至完全溶解，不允許將尚有成團培養基的狀態(tài)下，直接進(jìn)行加熱煮沸,那樣很容易出現滅菌不徹底的現象，尤其是?#34892;?#21547;瓊脂的培養基,甚至會(huì )有部分瓊脂不能徹底溶解，導致倒出的平皿上有明顯的麩皮狀瓊脂小顆粒，或者?#34892;?#21547;有染料的培養基?#37096;?#33021;出現染料顆粒,都會(huì )影響培養基的使用。

3、攪拌

煮沸全程必須持續不斷攪拌,以免糊底。

4、防燙

?#22909;?#27832;騰后，要及時(shí)將搪瓷缸從電磁爐上取下，以免液體沸出，造成培養基沾染或燙傷操作人員。

---想了解更多資訊，歡迎關(guān)注“藥物微生物檢驗”公眾號！---