操作方法二£º
1.根據標準要求或對污染情況的估計£¬選擇2~3個(g¨¨)適宜稀釋度£¬分別在制10倍遞增稀釋的同時(sh¨ª)£¬以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中£¬每個(g¨¨)稀釋度做兩個(g¨¨)平皿¡£將涼至46¡æ營(y¨ªng)養瓊脂培養基注入平皿約15ml£¬并轉動(d¨°ng)平皿£¬混合均勻¡£同時(sh¨ª)將營(y¨ªng)養瓊脂培養基傾入加有1ml稀釋液£¨不含樣品£©的滅菌平皿內作空白對照¡£待瓊脂凝固后£¬翻轉平板£¬置36¡À1¡æ溫箱內培養48¡À2h£¬取出計算平板內菌落數目£¬乘以稀釋倍數£¬即得每克£¨每毫升£©樣品所含菌落總數¡£
2.傾注用培養基應在46¡æ水浴內保溫£¬溫度過(gu¨°)高會(hu¨¬ )影響細菌生長(ch¨¢ng)£¬過(gu¨°)低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻¡£如無(w¨²)水浴£¬應以皮膚感受較熱而不燙為宜¡£傾注培養基的量規定不一£¬從12~20ml不等£¬一般以15ml較為適宜£¬平板過(gu¨°)厚可影響觀(gu¨¡n)察£¬太薄又易于干裂¡£傾注時(sh¨ª)£¬培基底部如有沉淀物£¬應將底部棄去£¬以免與菌落混淆而影響計數觀(gu¨¡n)察¡£
3.為使菌落能在平板上均勻分布£¬檢液加入平皿后£¬應盡快傾注培養基并旋轉混勻£¬可正反兩個(g¨¨)方向旋轉£¬檢樣從開(k¨¡i)始稀釋到傾注最后一個(g¨¨)平皿所用時(sh¨ª)間不宜超過(gu¨°)20min£¬以防止細菌有所死亡或繁殖¡£
4.培養溫度一般為37¡æ£¨水產(ch¨£n)品的培養溫度£¬由于其生活環(hu¨¢n)?#20056;?#28331;較低£¬故多采用30¡æ£©¡£培養時(sh¨ª)間一般為48h£¬?#34892;?#26041;法只要求24h的培養即可計數¡£培養箱應保持一定的濕度£¬瓊脂平板培養48h后£¬培養基失重不應超過(gu¨°)15%¡£
5.為了避免食品中的微小顆粒或培基中的雜質(zh¨¬)與細菌菌落發(f¨¡)生混淆£¬不易分辨£¬可同時(sh¨ª)作一稀釋液與瓊脂培基混合的平板£¬不經(j¨©ng)培養£¬而于4¡æ環(hu¨¢n)境中放置£¬以便計數時(sh¨ª)作對照觀(gu¨¡n)察¡£在某些場(ch¨£ng)合£¬為了防止食品顆粒與菌落混淆不清£¬可在營(y¨ªng)養瓊脂中加入氯化三苯四氮唑£¨TTC£©£¬培養后菌落?#22987;t色£¬易于分別¡£
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