之前收到網(w¨£ng)友的提問(w¨¨n)£¬想根據GB/T 4789.6-2016¡¶食品安全國家標準 食品微生物學(xu¨¦)檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗¡·檢測產(ch¨£n)品£¬但?#21069;l(f¨¡)現2016版與2003版檢測過(gu¨°)程有所不同£¬對增加的PCR確認試驗的部分有所疑問(w¨¨n)¡£
   
標準中¡°6.5 PCR確認試驗¡±部分詳細介紹了PCR實(sh¨ª)驗的基本過(gu¨°)程和耗材要求£¬主要步驟包括菌落挑取¡¢核酸提取¡¢PCR反應體系的配制¡¢PCR循環(hu¨¢n)條件¡¢電泳¡¢結果判定¡£
  對于經(j¨©ng)常做PCR的實(sh¨ª)驗員來(l¨¢i)說(shu¨­)£¬按照標準操作就可以了¡£但是對于沒(m¨¦i)有做過(gu¨°)PCR實(sh¨ª)驗的小白£¬在拿到標準之后£¬應該如何準備試劑耗材£¿怎樣進(j¨¬n)行實(sh¨ª)驗呢£¿
  今天先來(l¨¢i)說(shu¨­)一說(shu¨­)4.28 Marker¡£
¡¾原文¡¿
   4.28 Marker:分子量包含 100bp¡¢200bp¡¢300bp¡¢400bp¡¢500bp¡¢600bp¡¢700bp¡¢800bp¡¢900bp¡¢ 1000bp¡¢1500bp條帶¡£
  實(sh¨ª)驗小白心里想£º哦莫£¡PCR實(sh¨ª)驗這么復雜嗎£¿光一個(g¨¨)Marker試劑就要準備這么多£¿不是說(shu¨­)PCR比傳統的微生物培養好做嗎£¿果斷放棄¡­¡­
Marker是啥£¿
  DNA Marker£¨?#27493;ÐDNA Ladder£©?#21830;?#23450;分子量的雙鏈DNA片段組成£¬已混有含藍色染料的上?#27891;?#27798;液£¬適用于瓊脂糖凝膠電泳時(sh¨ª)作為DNA分子量標準¡£
這么說(shu¨­)太官方了£¬換個(g¨¨)說(shu¨­)法£¬Marker就相當于一把尺子£¬是尺?#27891;?#32943;定有刻度£¬這個(g¨¨)刻度就是不同大小的條帶¡£
聰明的你應該也猜到了£¬其實(sh¨ª)標準中說(shu¨­)的不同分子量的條帶其實(sh¨ª)是在同一個(g¨¨)Marker里的¡£當我們買(m¨£i)回來(l¨¢i)一管Marker£¬這管Marker里就會(hu¨¬ )有分子量不同的我們需要的條帶¡£
  Marker有不同的規格£¬常見(ji¨¤n)的有DL2000¡¢DL5000¡¢DL15000¡¢100bp DNA Ladder?#21462;£Marker在電泳之后£¬最后結果觀(gu¨¡n)察時(sh¨ª)會(hu¨¬ )呈現出如下圖的條帶¡£這些條帶就是¡°尺子¡±上的¡°刻?#21462;±¡?/span>
  Marker的價(ji¨¤)格也不貴£¬而且每次上樣5¦ÌL就足夠£¬1mL的Marker也可以夠我們用很久很久了¡£
  便宜又好用£¬原來(l¨¢i)只需要準備1支就可以£¬是不是長(ch¨¢ng)舒一口氣£¿
  只要嘗試過(gu¨°)PCR實(sh¨ª)驗£¬它的簡(ji¨£n)便快捷會(hu¨¬ )超乎你想象!
  其實(sh¨ª)國外很多實(sh¨ª)驗?#20197;?#24050;經(j¨©ng)用PCR的方法進(j¨¬n)行微生物檢測£¬不僅通量高¡¢準確性還好£¬國內很多標準也早已使用PCR的方法進(j¨¬n)行檢測£¬畢竟誰(shu¨ª)不喜歡簡(ji¨£n)單又高效的檢測方法呢£¿
  希望今天的分享會(hu¨¬ )對您的實(sh¨ª)驗有所幫助¡£

如果您有關(gu¨¡n)于PCR的實(sh¨ª)驗困擾也可?#26376;?li¨¢n)系小編£¬也可以試一下我們的線(xi¨¤n)下PCR培訓課程哦£¡